一、氣相色譜層析基本原理

    混合樣品的氣流通過固定相時(shí)，根據(jù)各組分對(duì)固定相的吸附強(qiáng)弱不同使不同成分得到分離。

     利用氣相色譜層析技術(shù)做為微生物診斷的工具已成功地用于微生物的分類和鑒定。該法敏感性強(qiáng)，能夠分離和檢測(cè)到毫微克的水平。它具有快速的特點(diǎn)，常在數(shù)十分鐘甚至數(shù)小時(shí)就可以對(duì)傳染病做出早期診斷。其結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，但不足之處是操作中各因素不易控制，方法不易標(biāo)化等。

二、氣相色譜層析試驗(yàn)條件的選擇

1、柱溫選擇 

   柱溫選擇對(duì)分離度影響很大，常是條件選擇的關(guān)鍵。選擇的基本原則是：在使難分離的組分有盡可能好的分離高度的前提下，盡可能采取較低溫度，但以保留時(shí)間適宜及不拖尾為度。

⑴ 高沸點(diǎn)混合物（200℃～400℃），若需在較低的柱溫下分析，可采用低固定液配比1％～3%，采用高靈敏檢測(cè)器，柱溫可比沸點(diǎn)低100℃～150℃，在200℃～250℃的柱溫下分析。

⑵ 沸點(diǎn)＜300℃的樣品，可用3％～25%固定液配比。沸點(diǎn)越低，所用配比越高，柱溫可比平均沸點(diǎn)低50℃至平均沸點(diǎn)的范圍選擇。

2、載體選擇 

   載體采用低線速時(shí)，宜用氮?dú)猓桓呔€速時(shí)用氫氣。柱越長，柱內(nèi)有較大壓力降，宜用氫氣。載氣采用低線速時(shí)為20ml～80ml/min。

3、色譜柱的選擇 

   要注意極性及高使用溫度，柱溫不能超過高使用溫度。固定相按極性相似的原則選擇。色譜柱的內(nèi)徑大小、長度都能影響分離率。一般而言，內(nèi)徑越小，長度越長，分離效果越好，一般柱長為1m～5m（毛細(xì)管柱則20m～100m）。

   層析冷柜廠家提醒填充劑顆粒一般采用40目～60目，60目～80目及80目～100目大小。長柱子宜用粒度大些的，以減少柱壓降，短柱子則用粒度細(xì)的。

   氣相色譜中固定液的含量對(duì)分離效率的影響較大。一般采用固定液與載體重量之比為15︰100～25︰100。采用高靈敏度的檢測(cè)器，由于進(jìn)樣量減少，固定液含量可以降至5︰100以下。這樣可以使用較低柱溫，從而提高柱效，縮短分析時(shí)間。但固定液用量太少會(huì)引起吸附。

4、其它條件

⑴ 氣化室溫度及檢測(cè)室溫度選擇：氣化溫度取決于樣品的揮發(fā)性、沸點(diǎn)、穩(wěn)定性以及進(jìn)樣量，一般選擇稍高于樣品沸點(diǎn)，但不要超過沸點(diǎn)50%以上，以防分解。檢測(cè)室溫度需高于柱溫，一般高于柱溫30℃左右或與氣化室同溫。

⑵ 進(jìn)樣量：固定相在配比15％～35%的層析柱時(shí)，大進(jìn)樣量液體為10μl，氣體為10ml。一般樣品量液體4μl，氣體為0.5ml～3ml，固體小于1mg。

⑶ 橋電位選擇：散熱多和選擇大的橋電位，在靈敏度相同的情況下，應(yīng)盡量選擇低橋電位，以保護(hù)熱敏元件。